Per la convalida della determinazione della carica microbica, quali sono gli agenti inattivanti da usare?

Risposta:

La Farmacopea Armonizzata, al paragrafo 2.6.13, precisa che se il prodotto in esame possiede attività anti-microbica, questa deve essere, se possibile, rimossa o neutralizzata come descritto al Capitolo 2.6.12.

Se sono utilizzati dei tensioattivi per la preparazione del campione, si deve dimostrare la non tossicità verso i microrganismi e la compatibilità con eventuali inattivanti usati, come descritto in 2.6.12.

AGENTI INATTIVANTI

La funzione di Assicurazione di Qualità è offerta da una terza parte indipendente ed i laboratori aderiscono al programma di  “Proficiency Test” con un abbonamento.

Tutti i laboratori partecipanti ricevono, analizzano ed esaminano il materiale “challenge” per la presenza o assenza di microrganismi target oppure per il conteggio di microrganismi target.

Tutti i risultati sono elaborati ed il valore è stabilito in base ai risultati di tutti i laboratori partecipanti, indipendentemente dai metodi specifici utilizzati.

-“Proficiency Test Interno”

Questa funzione di Assicurazione di Qualità è nella maggioranza dei casi una funzione che il singolo laboratorio si è imposta.  Un laboratorio del gruppo sceglie il materiale “challenge” e chiede agli altri laboratori del gruppo di analizzare il materiale ricevuto per la presenza o assenza dei microrganismi target o per il conteggio dei microrganismi target. 

Tutti i risultati sono elaborati ed il valore è stabilito in base ai risultati di tutti i laboratori partecipanti, indipendentemente dai metodi specifici utilizzati.

-Glossario

Recupero Minimo Accettabile, valore medio, UFC, challenge test, microrganismi “challenge”, terreno agarizzato non selettivo, recupero percentuale, “pour plate” (tecnica per inclusione), coltura autentica di riferimento, coltura stock di riferimento, terreno agarizzato selettivo, “spread plate” (tecnica per striscio), coltura stock di lavoro.

-Introduzione

Ogni singola preparazione di terreno selettivo approntata in laboratorio, terreni commerciali pronti all’uso in piastra e basati sulla selettività devono essere sottoposti al controllo di qualità.

Oltre alle specificazioni di sterilità, pH, reazioni differenziali positive e negative e morfologia delle colonie si devono determinare e documentare anche la selettività ed il recupero.

-Dati di fatto

□ I terreni selettivi raramente dimostrano il recupero del 100% di UFC in confronto ad un identico challenge di microrganismi su terreno non selettivo.

□ Si devono pertanto determinare i limiti di Recupero Minimo Accettabile per ogni singolo terreno selettivo utilizzato in ogni singolo laboratorio.

-Recupero dei microrganismi “challenge” su terreno selettivo

La semplice procedura qui riportata  può essere utilizzata per dimostrare il recupero del microrganismi “challenge” su terreno selettivo.

(1) Selezionare la coltura stock di riferimento o la coltura stock di lavoro, rintracciabile rispetto ad una coltura autentica di riferimento, che sia appropriata rispetto alla caratteristiche del terreno selettivo usato per il challenge test.

(2) Preparare le diluzioni del microrganismo challenge per ottenere una concentrazione di 100 UFC.

Se si utilizza un terreno selettivo agarizzato con la tecnica  per inclusione (“poured plate”), si raccomandano 100 UFC per 1,0 mL.

Se si utilizza un terreno selettivo agarizzato, con la tecnica di striscio (“streak or spread plate”), si raccomandano 100 UFC per 0,1 mL.

(3) Inoculare 3 terreni agarizzati selettivi con 100 CFU “microrganismi challenge” per 1,0 mL o 0,1 mL.

Inoculare 3 terreni agarizzati non-selettivi (standard methods) con 100 UFC “microrganismi challenge”  per 1,0 mL or 0,1 mL.

(4) Incubare entrambi le serie di terreni  selettivi e non-selettivi secondo quanto indicato dalle specifiche  del  terreno selettivo.

(5) Ultimata la incubazione, contare e fare la media delle UFC sia per il terreno selettivo che non selettivo. 

Calcolare le medie e dividere il valore medio delle UFC del terreno non selettivo per le UFC del terreno selettivo. Moltiplicare il valore ottenuto per 100 per determinare il Recupero Percentuale.  

NOTA

Ulteriori notizie possono essere trovate nel Technical Manual 33.1. Edition della Microbiologics.

www.microbiologics.com

Quando si parla di qualità, si parla di ISO 9000, ma le ISO 9000 non sono altro che il livello minimo di qualità richiesta e fondamentalmente sono le condizioni minime necessarie perché un’azienda svolga una attività produttiva o commerciale. Per la vera qualità bisogna andare oltre, come ad esempio verso il sistema “Six Sigma”. La filosofia alla base di “Six Sigma” è che esiste una diretta correlazione tra prodotto (o servizio) e soddisfazione del cliente: meno difetti (non conformità) = cliente più soddisfatto.

- Il Sistema “Six Sigma”

“Six Sigma” è una misura statistica che indica di quanto un prodotto, servizio o processo varia dalla perfezione.

Secondo la definizione della Motorola, la disciplina “Six Sigma” significa che il livello di qualità non deve essere superiore a 3,4 difetti per milione di unità o servizi prodotti (DPMO=Defects Per Milion Opportunities). Il valore 3,4 è stato calcolato tenendo conto che nella pratica in un qualsiasi processo esiste una variazione media naturale +/- 1.5.

Per dare un’idea concreta dei 6 differenti valori del sistema “Six Sigma”, si può portare un esempio di un black-out in energia di uno stabilimento: più alto è il valore Sigma, migliore è la qualità.

Sigma 1: black-out di 228 ore al mese

Sigma 2: black-out di 33   ore al mese

Sigma 3: black-out di 1,94 ore al mese (il più diffuso)

Sigma 4: black-out di 2,72 minuti al mese

Sigma 5: black-out di 1,48 secondi al mese

Sigma 6: black-out di 0,005 secondi al mese

Le 4 fasi chiave del processo “Six Sigma”

- MISURA – Identificazione dei punti chiave che influenzano  la qualità e che possono essere misurati o contati.
- ANALISI – Comprensione delle cause che determinano i difetti.
- MIGLIORAMENTO – Conferma delle variabili chiave e quantificazione degli effetti di queste variabili sulle caratteristiche qualitative
- MONITORAGGIO / VERIFICA – Assicurazione che le modifiche scelte mantengano le variazioni chiave entro i limiti stabiliti.

- Le idee che minano la qualità

Se la direzione non è convinta, il sistema “Six Sigma” è minato alla base. Tipiche erronee affermazioni:

- “Errare humanum est” (non ci si può migliorare?)
- “Un eccesso di qualità costa troppo e richiede troppo tempo” (a livello “3 Sigma” si ha un aumento dei margini del 29%, 12-18% aumento di capacità produttiva, 10-30% riduzione di capitale)
- “E’ sufficiente superare il fatturato dell’anno scorso” (nelle odierne situazioni di mercato non è più possibile pensare in tal senso)
- “Siamo meglio dei concorrenti” (ma sino a quando?).

- Dove trovare informazioni sul sistema “Six Sigma”

Implementing Six Sigma – Smarter solutions using statistical methods di Forrest e Breyfogle – 791 pagine – ISBN:0-471-29659-7 – Costo 138.25 Euro – Order by Credit Card 0044 1462 431525.

- GIA – Trading Dictionary of Foreign/International Trade Terms: S

http://www.giagroup.com/terms-of-trade-s.cfm

- California State University

http://it.csumb.edu/departments/data/glossary.html

- Standards groups – issues related to quality improvement

http://krouwerconsulting.com/Essays/StandardsGroups.htm

- ISO 10993-17:2002 - Biological evaluation of medical devices — Part 17: Establishment of allowable limits for leachable substances

http://www.iso.org/iso/en/CatalogueDetailPage.CatalogueDetail?CSNUMBER=23955&scopelist=ALL

Le misure adottate a livello europeo in tema di sicurezza alimentare sono finalizzate ad assicurare gli standard più elevati possibili di sicurezza, tutelare gli interessi dei consumatori, garantire l’affidabilità e uniformità dei processi di controllo e prevenire ostacoli ingiustificati alla libera circolazione dei prodotti alimentari e degli alimenti per gli animali.

Il riconoscimento della competenza dei Laboratori di prova attraverso l’accreditamento è un requisito richiesto dalla normativa europea in materia di controllo ufficiale e dalle disposizioni nazionali in materia di autocontrollo dei prodotti alimentari.

In tale contesto, l’accreditamento dei Laboratori di controllo, oltre ad accrescere la fiducia reciproca tra gli Stati Membri, è individuato come lo strumento per garantire la qualifica delle informazioni scientifiche per la valutazione del rischio, la valutazione della competenza dei Laboratori da parte delle Autorità preposte e l’efficacia delle attività di controllo ufficiale e di autocontrollo nell’intera filiera produttiva.

Un principio ribadito dal Regolamento (CE) n. 765/2008 che ha elaborato il quadro normativo per la gestione e l’organizzazione dell’accreditamento a livello comunitario.

I Laboratori di prova coinvolti nel controllo ufficiale e nell’autocontrollo dei prodotti alimentari sono quindi tenuti ad operare in conformità alle disposizioni cogenti riguardanti la sicurezza dei prodotti e allo standard internazionale UNI CEI EN ISO/IEC 17025, al fine di garantire la qualità e la trasparenza dei processi analitici e dei dati, obiettivo da raggiungere mediante l’accreditamento delle prove.

Gli argomenti della Guida ACCREDIA - ISS ”Il controllo ufficiale e l’autocontrollo dei prodotti alimentari: la scelta dei metodi di prova chimici” riguardano:

- Normativa nazionale ed europea in materia di accreditamento;
- Scelta dei metodi di prova;
- Equivalenza dei metodi di prova;
- Validazione dei metodi di prova sviluppati dal Laboratorio;
- Verifica delle prestazioni del Laboratorio;
- Espressione dei risultati, incertezza di misura associata e interpretazione dei dati;
- Acque destinate al consumo umano;
- Prodotti alimentari (Micotossine; Piombo, Cadmio, Mercurio, Stagno inorganico, 3-MCPD e idrocarburi policiclici aromatici 31; Nitrati; Residui di anabolizzanti e di altre sostanze farmacologicamente attive.

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