Recupero dei microrganismi su terreno selettivo con il “challenge test”

Technical Information Bullettin TIB 134 “Microbiologics” (Page 88-89)

-Glossario

Recupero Minimo Accettabile, valore medio, UFC, challenge test, microrganismi “challenge”, terreno agarizzato non selettivo, recupero percentuale, “pour plate” (tecnica per inclusione), coltura autentica di riferimento, coltura stock di riferimento, terreno agarizzato selettivo, “spread plate” (tecnica per striscio), coltura stock di lavoro.

-Introduzione

Ogni singola preparazione di terreno selettivo approntata in laboratorio, terreni commerciali pronti all’uso in piastra e basati sulla selettività devono essere sottoposti al controllo di qualità.

Oltre alle specificazioni di sterilità, pH, reazioni differenziali positive e negative e morfologia delle colonie si devono determinare e documentare anche la selettività ed il recupero.

-Dati di fatto

□ I terreni selettivi raramente dimostrano il recupero del 100% di UFC in confronto ad un identico challenge di microrganismi su terreno non selettivo.

□ Si devono pertanto determinare i limiti di Recupero Minimo Accettabile per ogni singolo terreno selettivo utilizzato in ogni singolo laboratorio.

-Recupero dei microrganismi “challenge” su terreno selettivo

La semplice procedura qui riportata  può essere utilizzata per dimostrare il recupero del microrganismi “challenge” su terreno selettivo.

(1) Selezionare la coltura stock di riferimento o la coltura stock di lavoro, rintracciabile rispetto ad una coltura autentica di riferimento, che sia appropriata rispetto alla caratteristiche del terreno selettivo usato per il challenge test.

(2) Preparare le diluzioni del microrganismo challenge per ottenere una concentrazione di 100 UFC.

Se si utilizza un terreno selettivo agarizzato con la tecnica  per inclusione (“poured plate”), si raccomandano 100 UFC per 1,0 mL.

Se si utilizza un terreno selettivo agarizzato, con la tecnica di striscio (“streak or spread plate”), si raccomandano 100 UFC per 0,1 mL.

(3) Inoculare 3 terreni agarizzati selettivi con 100 CFU “microrganismi challenge” per 1,0 mL o 0,1 mL.

Inoculare 3 terreni agarizzati non-selettivi (standard methods) con 100 UFC “microrganismi challenge”  per 1,0 mL or 0,1 mL.

(4) Incubare entrambi le serie di terreni  selettivi e non-selettivi secondo quanto indicato dalle specifiche  del  terreno selettivo.

(5) Ultimata la incubazione, contare e fare la media delle UFC sia per il terreno selettivo che non selettivo. 

Calcolare le medie e dividere il valore medio delle UFC del terreno non selettivo per le UFC del terreno selettivo. Moltiplicare il valore ottenuto per 100 per determinare il Recupero Percentuale.  

Fonte:  Ulteriori notizie possono essere trovate nel Technical Manual 33.1. Edition della Microbiologics.